蜂花粉中黄酮类化合物种类繁多，含量丰富。目前在蜂花粉中发现的黄酮类化合物有：柚皮素、异鼠李素、山奈酚、槲皮素、原花青素等。近年油菜蜂花粉中黄酮类物质成分研究得到了广泛关注。杨洁等利用HP1CDAD和HPIC—Ms技术对从油菜蜂花粉得到的提取物进行了定性分析，证实油菜蜂花粉中黄酮类物质主要以山奈酚和槲皮素的形式存在，其余黄酮类物质含量很少。另外，杨必成等采用HP1c—uV法测定了油菜蜂花粉中各黄酮类物质含量，发现槲皮素和山奈酚含量占总黄酮含量的97．6。薄层色谱法(Thinlayerchromatography，TIc)属于吸附薄层色谱分离法，混合物中各成分对固定相的吸附能力不同，当流动相流过固定相时，混合物中各成分在流动相和固定相中不断循环重复吸附、解吸附过程，从而实现快速分离混合物中各成分的目的。TIcDPPH将薄层色谱法和抗氧化活性测定合二为一，是一种快速筛选生物活性物质的方法。它利用薄层色谱法将混合物各成分分离，再喷洒DPPH溶液显色，薄层板上呈黄色的区域为具有清除自由基活性的部位，而呈紫色的区域为非活性部分。

T1CDPPH法具有快捷、直观、操作方便、灵敏度高等优点，广泛应用于筛选天然提取物中具有清除自由基或抗氧化活性的化合物]。郭金凤等采用TIC-DPPH法筛选榆叶合叶子中的抗氧化活性成分，活性部位斑点呈黄色，并通过展开斑点大小比较了各成分的抗氧化活性。ChaaibF等Ⅲ利用TIC-DPPH法确定了美国崖椒根皮的二氯甲烷提取物中的抗氧化活性成分。

目前，油菜蜂花粉中黄酮类物质均采用传统的方法进行辅助提取，例如超声波辅助提取、生物酶法发酵辅助提取、温差破壁辅助提取等。而采用脉冲电场这一新兴技术辅助提取油菜蜂花粉中黄酮类物质还未见诸报道，其提取物中黄酮类物质成分的研究亦鲜有报道。本试验拟采用脉冲电场辅助提取黄酮类物质，通过TIC-DPPH筛选提取物中具有抗氧化活性的主要成分，并利用HPIC法定量分析油菜蜂花粉中两种主要黄酮类物质——槲皮素和山奈酚的含量，以期为油菜蜂花粉及其相关产品的开发提供依据。

1材料与仪器

1．1材料与试剂

油菜蜂花粉：江西省新建县汪氏蜂蜜园；甲醇：色谱纯，RCILabscanCo．，Itd；无水槲皮素标准品：BR级，国药集团化学试剂有限公司；山奈酚标准品：BR级，国药集团化学试剂有限公司；1，1-二苯基一2苦肼自由基(2，2-diphenyl一1一picrylhydrazyl，DPPH)：美国Sigma-Aldrich公司；无水乙醇、苯、甲酸、乙酸乙酯：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；硅胶板：100mlTl×100mm，青岛谱科分离材料有限公司；聚偏氟乙烯微孔滤膜：0．45Fm，上海兴化净化材料厂。

1．2主要仪器设

备高效液相色谱仪，主要包括二元液相泵(型号1525，新加坡Waters公司)、自动进样器(型号2707，新加坡Waters公司)、光电二极管阵列检测器(型号2998，新加坡Waters公司)和电脑控制系统；循环式水式真空泵：SHZ—D(Ⅲ)型，巩义予华仪器有限责任公司；旋转蒸发器：RE2000B型，上海亚荣生化仪器厂。