酪氨酸酶是含铜的氧化还原酶，广泛分布于生物体中，具有双重催化活性，既可催化L-酪氨酸羟基化生成L-多巴，也可将L-多巴氧化生成多巴醌，后者进一步氧化聚合形成黑色素，是参与人体皮肤黑色素形成的关键酶。抑制酪氨酸酶活性可减少体内黑色素和色斑的生成，从而起到美白怯斑的作用。

从天然食材中提取分离得到安全、高效的酪氨酸酶抑制剂已成为目前研究热点。研究表明，某些植物多糖对酪氨酸酶活性具有一定抑制作用。Yang等151发现，龙眼果皮多糖具有良好的酪氨酸酶抑制活性，能够抑制L-酪氨酸生成L-多巴；Tang等161研究显示，板栗多糖可抑制酪氨酸酶活性，该抑制作用属于竞争性抑制。

银耳俗称白木耳、雪耳，自古以来就是女性美容养颜佳品。多糖是银耳的主要活性物质，具有增强免疫力、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、修复记忆障碍等生物活性。来吉祥等发现，银耳多糖具有优良的保湿功效，用于化妆品中可减轻皮肤粗糙度，增强皮肤弹性。刘卉研究显示，化妆品中以0.05%银耳多糖替代0.02%透明质酸能达到更好的保湿效果。然而，关于银耳多糖对酪氨酸酶的抑制作用却鲜有报道。基于此，试验比较不同银耳多糖醇沉级分对酪氨酸酶的抑制作用，探讨其对酪氨酸酶的抑制作用类型，以期为银耳多糖在化妆品中的高附加值利用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

福建古田银耳（市售）。酪氨酸酶（730U/mg)、L-酪氨酸、L-多巴（上海源叶生物科技有限公司）；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH)、葡聚糖系列标准品（2.5~5348kDa，色谱纯试剂）（美国Sigma公司）。

1.2仪器与设备

SNB-2数字黏度计（上海精天仪器有限公司）；UV6000PC-1100型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；SpectraMax190全波长酶标仪（美国MolecularDevices公司）；WatersBreezeGPC凝胶渗透色谱仪（美国沃特斯有限公司）。

1.3试验方法

1.3.1银耳多糖分步醇沉级分的制备与纯化

1.3.1.1银耳多糖分步醇沉级分的制备

参考高温高压法提取银耳多糖，并稍作修改。称取一定质量的干银耳，加入其60倍质量的饮用纯净水，浸泡20min后打浆，将所得浆液于0.1MPa、121℃下加压提取30min,离心后得到上清液，于60℃下真空浓缩使其黏度达到3.4±0.1Pa/s(25转子#4,60r/min),得到浓缩液。在浓缩液中加入无水乙醇使体系乙醇体积分数达20%,搅拌后于4℃下静置24h，离心后分别收集沉淀物与上清液；将所得沉淀物用无水乙醇及丙酮洗涤、抽滤后进行真空冷冻干燥，得到银耳多糖醇沉级分STP20。将所得的上清液真空浓缩至上述黏度，加人无水乙醇调整体系乙醇体积分数40%,搅拌后按照上述方法进行静置沉淀和离心、洗涤、抽滤、干燥得到STP40。将所得上清液按照上述方法依次调整体系的乙醇体积分数分别达到60%,80%得到银耳多糖级分STP60、STP80。将得到的4种银耳多糖级分称质量后按照式（1)计算其得率。