邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯［di-（2-ethylhexyl）phthalate,DEHP］是常用的塑化剂，被广泛用于化妆品、食品包装材料和医疗产品。DEHP具有神经毒性作用，可导致大鼠大脑神经变性，影响小鼠学习和记忆能力，其潜在机制尚不清楚。细胞凋亡是在生理或某些病理条件下由基因控制的细胞自主有序的自杀性死亡，它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用，Bcl-2家庭成员中的Bcl-2及Bax在细胞凋亡的基因调控过程中起重要作用。

研究表明中枢神经系统的损伤往往伴有大量神经元细胞凋亡，而且神经毒物所引起的细胞凋亡多发生在大脑皮质冏；另外，氧化应激也参与神经元的死亡，并导致许多神经系统疾病的细胞凋亡过程国。本研究选用初断乳ICR雄性小鼠，研究DEHP对小鼠大脑皮质氧化损伤及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，揭示其神经毒性可能作用机制。

1材料与方法

1.1主要试剂

DEHP（纯度399.0%,国药集团化学试剂有限公司），溶剂为玉米油。考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒（南京建成生物工程研究所），Bcl-2单克隆抗体、Bax单克隆抗体及山羊抗小鼠IgG（上海赛维尔生物科技有限公司）。RIPA裂解液、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、P-actin（Servicebio公司）。

1.2实验动物及处理

选择初断乳雄性ICR小鼠40只，体重16-18g,由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物合格证号：SCXK（鲁）20140007o按体重随机分为对照组（0mg/kg）和DEHP250、500、1000mg/kg染毒组，每组10只。染毒组连续灌胃染毒8周，6次/周，于末次染毒24h后处死；对照组给予等量玉米油。实验在SPF级动物房内进行，动物房温度20~24七，湿度40%~70%。

1.3检测指标及方法

1.3.1一般状况观察

每天观察小鼠进食、饮水、行为活动、尿液、粪便等有无异常，每周称量小鼠体重1次以调整给药量。

1.3.2大脑脏器系数

于染毒24h后称重并断头处死，迅速剥离小鼠大脑，吸干水分并称重。脏器系数（％）=脏器湿重（g）/体重（g）xl00%1.3.3SOD、GSH-Px活性及MDA含量检测每组选取6只小鼠大脑剥离皮质，按重量体积比加入9倍生理盐水，匀浆后低温高速离心，收集上清，考马斯亮蓝法测定其蛋白含量。采用轻胺法测定SOD活性，硫代巴比妥酸（TBA）法测定MDA的含量，苯甲酸显色法测定GSH-Px的活性，严格按照试剂盒要求步骤操作。

1.3.4Bcl-2和Bax蛋白表达检测

每组选取3只小鼠大脑皮质裂解，用预冷的含1%PMSF的蛋白裂解液提取总蛋白，BCA法测定总蛋白含量。样品经12%的凝胶电泳分离，转膜，封闭，将膜与一抗Bcl-2（稀释比例1:2000）和Bax（稀释比例1:400）室温孵育2h,洗涤，将膜浸入以1：3000体积比稀释的二抗，室温2h,漂洗后用ECL化学发光试剂盒增强发光，X线胶片显影。使用ImageJ软件测算以上指标的灰度值，比去内参p-actin的灰度值得到相对浓度后，再用统计软件进行统计。

1.4统计分析

采用SPSS13.0软件进行分析。数据结果以齐士s表示，组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Dunnett检验。检验水准a=0.05。