睾酮甲醇溶液标准物质的定值及不确定度评定

摘要:针对目前食品中兴奋剂类药物检测的需求，研制了睾酮甲醇溶液国家级标准物质。通过对经筛选的市售原料纯品进行液相色谱﹒质谱(LC-MS)和红外光谱(R)定性分析后，利用高效液相色谱法(HELC)对睾酮蛋白同化类固醇类兴奋剂原料进行纯度定值。利用HPLC在244 rm监测，0.1% HAc -乙腈(50 :50，体积比)作为流动相进行等度洗脱，以hertsil ODS-SP(250 mm x4.6 mm，5 pum)进行分离，测得液相条件下睾酮固体的纯度为99.89%。为保证纯度测量的准确性，采用多家联合定值对睾酮的纯度进行检验。睾酮溶液标准物质经重量﹒重量法配制后，进行均匀性和稳定性实验，浓度赋值后进行不确定度评定。研制的睾酮溶液标准物质目前已被批准为国家二级标准物质并应用于实际检测。

关键词:睾酮;标准物质;液相色谱法;多家联合定值;不确定度评定

兴奋剂 , 原指能刺激人体中枢神经系统 , 使人产生兴奋 , 从而提高机能状态的药物 , 后来在体育 界被用来泛指可对人体机能产生影响 , 有助于提高运动能力的药物。目前所称的兴奋剂为禁用药物的 统称。借助服用各种非人体必需的食物或药物以求在竞技中获得优势的做法已有很久的历史 [ 1 - 3 ]。

类 固醇是广泛分布于生物界的一大类环戊稠环全氢化菲衍生物的总称 , 又称甾醇、甾族化合物。绝大多 数类固醇类物质均具有生理活性 , 尤以蛋白同化雄性类固醇的活性较为显著。2004年希腊雅典夏季奥 运会上 , 世界反兴奋剂机构 (WADA ) 共查出 23例阳性尿样 , 其中有 16例与蛋白同化类固醇激素有 关 , 类固醇类兴奋剂的滥用严重影响体育比赛的公平公正性 , 且长期使用这类兴奋剂会严重干扰人体 的自然激素平衡 , 导致异性化现象 , 还可能引起肝、肾的严重损伤 , 并发肝癌、心脏病 , 产生药物依 赖以及出现严重的情感及精神病症 [ 4 - 6 ]。 睾酮 (Testosterone)是一种蛋白质同化激素 , 具有同化作用强、雄激素样作用弱的特点 , 可作为其它甾体激素的原料中间体 [ 7 ]。

2008年世界反兴奋剂机构公布的 《禁用物质清单 》中列举的蛋白同化制 剂主要包括睾酮等 9种蛋白同化类固醇类兴奋剂 [ 8 - 9 ]。 为支持动物源性食品中违禁药物的检测分析 , 确保兴奋剂检测结果的可靠性、可比性和溯源 性 [ 10 - 11 ] , 研究睾酮甲醇溶液标准物质 , 可为动物源性食品中违禁药物的检测提供技术支撑。本文首次 报道了睾酮溶液标准物质的研制过程 , 并分析了标准物质的制备及分析过程对定值结果的不确定度。

1 实验部分

111 仪器与试剂

1.1仪器与试剂 7500系列电感耦合等离子质谱系统(太P-MS,Agilent公司)，LTQ液相色谱-质谱联用仪(Thermo F innigan公司)， A vatar 205 FT-R中波段红外光谱仪(Themo Nicolet公司)，LC-20A高效液相色谱 (日本岛津公司)，色谱柱hertsilODS-SP(4.6 mm x250 mm xS pm，日本 G Scence hnc )，IPA Pyns T热失重分析仪(Perk inEmer)。 标准物质原料通过理化特性测试进行定性分析确定主体成分，经过初步定量分析筛选便乙满足纯度要求。睾酮(纯度大于99%，Fluka公司)，经真空包装密封储存在保干器并冷藏于4℃冰箱中，甲 醇试剂(色谱纯，Riedel - de - Haen公司)。