美雄酮甲醇溶液标准物质的定值及不确定度评定

摘要针对目前食品中兴奋剂类药物检测的需求﹐研制了美雄酮甲醇溶液国家级标准物质。通过对经筛选的市售原料纯品进行液相色谱质谱和红外光谱定性分析后s研究利用高效液相色谱法(HPLC)和差示扫描量热法(DSC)对美雄酮蛋白同化类固醇类兴奋剂原料进行纯度定值。利用HPLC在245nm 监测,以水(含0.1% HAc)+乙腈=50+50(体积比)作为流动相进行等度洗脱,以Inertsil ODS-SP(250mm x 4.6mm,5um)进行分离,测定了液相条件下的美雄酮固体的纯度。综合考虑DSC对美雄酮纯度测定的结果,得到美雄酮纯度定值为99.6%。同时,分别利用热重分析法和电感耦合等离子体质谱法测定水分和无机元素杂质的含量。美雄酮溶液标准物质经重量-重量法配制后,进行均匀性和稳定性实验,浓度赋值后进行了不确定度评定。研制的美雄酮溶液标准物质目前已被批准为国家二级标准物质并应用于实际的检测中。

关键词美雄酮﹑标准物质﹐液相色谱法﹐差示扫描量热法﹐不确定度评定

兴奋剂，原指那些能刺激人体中枢神经系统，使人产生兴奋，从而提高机能状态的药物，后来在体育 界被用来泛指那些可以对人体机能产生影响，有助于提高运动能力的药物。目前所称的兴奋剂实为禁 用药物的统称(此外还包括禁用手段，如血液回输等)。借助服用各种非人体必需的食物或药物以求在 竞技中获得优势的做法已有很长的历史［1 ～ 3］ 。

类固醇是广泛分布于生物界的一大类环戊稠环全氢化菲衍生物的总称，又称甾醇、甾族化合物。绝 大多数类固醇类物质均具有生理活性，尤以蛋白同化雄性类固醇的活性较为显著。2004 年希腊雅典夏 季奥运会上，世界反兴奋剂机构(WADA) 共查出 23 例阳性尿样，其中有 16 例与蛋白同化类固醇激素 有关，类固醇类兴奋剂的滥用严重影响到体育比赛的公平公正性，且长期使用这类兴奋剂会严重干扰人 体的自然激素平衡，导致异性化现象，还可能引起严重的肝、肾损伤，并发肝癌、心脏病，并产生药物依赖，还可出现严重的情感及精神病症［4 ～ 6］ 。 美雄酮(methandienone，结构见图式 1)是一种蛋白质同化激素，具有同化作用强、雄性样作用小的 特点，而且还可以作为其它甾体激素的原料中间体［7］ 。

2008 年 WADA 公布的《禁用物质清单》列举的 蛋白同化制剂主要包括美雄酮等 9 种蛋白同化类固醇类兴奋剂［8，9］ 。 为了支持动物源性 食 品 中 违 禁 药 物 的 检 测 分 析，确 保 兴 奋 剂 检 测 结 果 的 可 靠 性、可 比 性 和 溯 源 性［10，11］ ，需要研究美雄酮甲醇溶液标准物质，本文报道了有关美雄酮溶液标准物质的研制过程。

1 实验部分

1. 1 材料与仪器 Agilent 7500 系 列 电 感 耦 合 等 离 子 质 谱 系 统 ( ICPMS) ; Perkin Elmer Diamond 差示扫描量热仪，Thermo Finnigan 公司 LTQ 液相色谱-质谱联用仪，中波段红外光 谱仪 205，岛津 Prominence LC-20A 高效液相色谱仪，色 谱柱 Inertsil ODS-SP，250mm × 4. 6mm，5 μm (GL Science Inc. 日本) ，Perkin Elmer TGA Pyris 1 热失重分 析仪。 标准物质原料通过理化特性测试进行定性分析确定主体成分;经过初步定量分析筛选使之满足纯 度要求。所需纯品原料主要采用市售产品，美雄酮纯度 > 99% ( Fluka) ，经真空包装密封储存在保干器 并冷藏于 4℃ 冰箱中，甲醇试剂为色谱纯( > 99. 8% ，Riedel-de-Haen 公司)。

1. 2 标准物质制备 溶液标准物质是采用纯品原料使用重量-重量法精确制备。方法如下:使用经过检定合格的分析天