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牛奶中抗生素检测方法

大C-会员头像-www.bzwz.com标准物质网 大C 0 639 2021-04-26
【摘要】一种牛奶中抗生素检测方法,包括对试管、容量瓶进行灭菌,量取试样并进行稀释,置于恒温槽中活化,试验菌生长和试样中抗生素抑制试验菌生长,测量抑菌圈大小等步骤,本发明能够对牛奶中的各种抗生素进行定性及定量检测,样品的前处理简单,对检测人员要求低,检测结果重复性好,本方法使检测人员无需接触高温、高毒物品,对人体健康安全有保障,同时检测周期短,成本低廉。
  • 1.一种牛奶中抗生素检测方法,包括以下步骤:

    (1)使用灭菌缓冲液对试管、容量瓶进行灭菌,再用蒸馏水进行冲洗,烘干后经115℃蒸气灭菌20min备用;

    (2)用经过灭菌的试管量取待检测试样10ml进行稀释,稀释分三步进行,第一步取5ml待检测试样置于50ml容量瓶中加水稀释,第二步从第一步所得试样中量取5ml置于50ml容量瓶中加水稀释,第三步从第二步所得试样中量取5ml置于100ml容量瓶中加水稀释,每次量取用刻度吸管,量取前用被量测溶液清洗吸管2~3次,吸取试样溶液后,用滤纸将外壁多余的液体擦去,从起始刻度开始放液,保证量取试样的纯度和精确度;

    (3)将步骤(1)中所得试样置于恒温槽中,控制恒温槽温度22℃,保持时间30min;

    (4)将经过消毒的不锈钢中空管放置在含有敏感试验菌的琼脂培养基中,量取步骤(2)所得试样10ml注入不锈钢中空管,试样中的抗生素分子向琼脂培养基呈球面放射状扩散;同时将琼脂培养基置于培养箱中,控制温度20-23℃,湿度60%,琼脂培养基中的试验菌开始生长;抗生素分子在琼脂培养基中的浓度,随离开不锈钢中空管的距离增大而降低,离不锈钢中空管越远,琼脂培养基中抗生素分子越少,相应的抗生素浓度越低;当抗生素分子扩散到一定时间,在不锈钢中空管周围形成一个能有效的抑制试验菌生长的范围,即抑菌圈,抑菌圈的大小随抗生素溶液浓度的不同而不同;

    (5)使用抑菌圈测量仪或者游标卡尺测量抑菌圈大小,使用游标卡尺测量时,眼睛视线与读数刻度垂直,用游标卡尺的尖端与抑菌圈直径的切点成垂直方向测量;

    (6)将步骤(4)所测得结果进行比对,高剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在20~24mm,中剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在16~20mm,低剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在12~16mm;

    (7)重复步骤(4)~(5)并对每次结果进行记录,以验证检测结果准确性。

    2.如权利要求1所述的牛奶中抗生素检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中灭菌缓冲液由以下重量份的原料组成:磷酸氢二钠30-40份,磷酸二氢钠20-25份,氯化钠15-20份,氯化钾10-20份,无水乙醇12-18份,二氯化钙6-10份,二氯化镁5-8份,三氯甲烷4-6份,氢氧化钠7-9份。

    3.如权利要求1所述的牛奶中抗生素检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中灭菌缓冲液PH值为7.4~7.6。

    4.如权利要求1所述的牛奶中抗生素检测方法,其特征在于,所述步骤(4)中试验菌由短小芽孢杆菌,产氨短杆菌,凝结芽孢杆菌,双歧杆菌一种或数种组成。

    5.如权利要求1所述的牛奶中抗生素检测方法,其特征在于,所述步骤(4)中琼脂培养基由以下重量份的原料组成:琼脂100-125份、增菌液80-100份、酵母提取物10-20份、氨基酸20-25份、磷酸二氢钾5-10份、蛋白胨20-30份、猪胆盐15-20份、水解酪蛋白12-18份、硝酸钠7-12份、酵母膏5-8份、葡萄糖10-12份、牛肉膏16-20份。

    6.如权利要求1所述的牛奶中抗生素检测方法,其特征在于,所述步骤(5)在测量抑菌圈大小先检查抑菌圈是否完整,如有破圈或者不完整舍弃。

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