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日落黄(sunsetyellow)又名食用黄色3号,是一种水溶性偶氮类化合物。由于其化学性质稳定、成本低廉、色泽鲜艳、着色力强、配色方便而被广泛用于食品的加工行业。研究表明,偶氮类化合物在体内可代谢生成致突变原前体———芳香胺类化合物,芳香胺则可被进一步代谢活化后成为亲电子产物与DNA和RNA结合形成加合物而诱发突变。另外,偶氮类化合物还可被氧化诱导产生自由基,进而再与体内物质反应产生活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS),ROS可攻击DNA造成氧化损伤。
作为偶氮类人工合成色素的日落黄同样绝非无毒无害,研究表明,在日常食品药品生产中,若一次大剂量或长期超标摄入日落黄,会严重损害肝脏功能,还可能引起儿童多动症和学习障碍,影响机体正常生长代谢和发育。目前,尚未见日落黄对试验动物寿命和机体抗氧化能力影响的报道。
果蝇因其代谢系统、生理功能、生长发育等方面同哺乳动物基本相似,且具有生活周期短、子代数量大、饲养简便、反应灵敏等优点,因而可以在药检和食品检验中取代啮齿类动物(如小鼠),从而克服啮齿类动物的试验周期长、人力和物力投入大、条件不易控制等缺点。本研究以黑腹果蝇为试验动物,探究日落黄对其寿命、总超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响,为在食品加工过程中合理利用日落黄提供科学依据。
黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster),由河北大学生命科学学院遗传实验室提供;日落黄,购自广东省东莞市添之彩食品厂;SOD、CAT和MDA试剂盒,购自南京建成生物工程研究所。
野生型黑腹果蝇培养于25℃恒温培养箱中,经扩大培养后供试验使用。
普通培养基的制备参照参考文献。根据我国《食品添加剂使用标准》(GB2760—2011),日落黄及其铝色淀于不同食品中最大使用量不同,其中最低的是谷类和淀粉类甜品,为0.02g/kg,原因在于该类食品可能被人大量摄入。又因所购买的日落黄纯度为67%,安全系数为100,故以此为基准等比设置4个试验浓度梯度,公比为3。在样品培养基制备时向基本培养基中加入日落黄,浓度分别为120mg/L、360mg/L、1080mg/L和3040mg/L,具体见表1,以不加日落黄的基本培养基为对照组(0mg/L),搅拌均匀后立即分装于灭菌的培养指管中,每管培养基厚度约为2.0cm。每种培养基均分装10(雌雄各5支)支指管。
取8h内羽化未交配的果蝇,用乙醚轻度麻醉后分开雌蝇和雄蝇,并随机将雌蝇和雄蝇分为1个对照组和4个剂量组,对照组果蝇饲养于基础培养基中,4个剂量组果蝇分别饲养于添加有浓度为120mg/L、360mg/L、1080mg/L和3040mg/L日落黄的培养基中,每管20只,各5个重复。置25℃、相对湿度为60%培养箱中培养,每4~6d更换1次培养基,在第20天开始统计果蝇死亡数量,直至果蝇全部死亡,计算各组平均寿命及平均最高寿命。
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