北方伟业计量集团有限公司
赖氨酸作为“第一缺乏氨基酸”,在生物体内的代谢起着重要的作用,而被广泛用于食品、医药及饲料等工业。饲料中添加赖氨酸可提高蛋白质的利用率,强化饲料营养,易于动物消化吸收,增加料肉比。由于赖氨酸易吸潮,因而在实际生产中都以赖氨酸盐酸盐或赖氨酸硫酸盐形式加以利用,以便于贮存、运输与使用。反刍动物同样需要赖氨酸,若直接添加晶体氨基酸,在瘤胃内会发生脱氨基作用达不到添加效果,而且会增加粪氮、尿氮排放。若将氨基酸包膜,使氨基酸能通过瘤胃不被破坏,不仅能提高反刍动物生产性能,还能降低日粮蛋白水平,减少粪氮、尿氮排放,提高生产效益。
目前赖氨酸盐酸盐的检测方法有高氯酸滴定法、凯氏定氮法、甲醛加入滴定法[5]及衍生法液相色谱测定等方法。在我国,现行的行业和国家检测标准(NY39-87和GB10794-2009),所采用的方法是非水滴定法,其中用到的试剂有:高氯酸滴定液、冰醋酸溶液、乙酸汞溶液,上述试剂或腐蚀性强,或为剧毒试剂,不但不易获得而且其操作对环境不友好,不利于大批量产品的质量控制。而液相色谱检测方法能进行批量检测,检测数据稳定可靠,样品为色谱分离检测,相比滴定法所受的干扰较小。
本研究建立了高效液相色谱法测定过瘤胃赖氨酸盐酸盐含量的方法,为过瘤胃赖氨酸盐酸盐质量标准的建立和产品质量控制提供依据。
1仪器与试药
赛默飞U3000高效液相色谱仪(备有紫外检测器);变色龙6.8色谱工作站。L-赖氨酸盐酸盐标准品(MACKLIN,批号:C10429138);过瘤胃赖氨酸盐酸盐样品(杭州康德权饲料有限公司提供,批号为190516、190518、190520)。
2色谱条件与系统适应性试验
色谱柱:AgelaTechnologies,VenusilMPC18(4.6×150mm,5μm);流动相:乙腈∶0.017mol/L庚烷磺酸钠溶液(取1.7g庚烷磺酸钠置于500mL量瓶中,加入0.1mLH3PO4,用纯水稀释并定容至刻度)=15:85,进样量20μL,检测波长195nm;流速1mL/min。此色谱条件下,由赖氨酸盐酸盐对照品溶液和供试品溶液分析可知,出峰时间一致,均为3.68min,且溶剂无干扰。
在上述色谱条件下分别取对照品溶液、供试样品溶液和阴性对照溶液各20μL进样分析,结果表明:理论板数按赖氨酸盐酸盐计算不低于4000,色谱峰分离度良好。对照品、供试样品和阴性对照溶液色谱图见图1。
3方法与结果
3.1溶液制备
对照品溶液:精密称取对照品赖氨酸盐酸盐0.25g,置100mL量瓶中,加超纯水约20mL溶解,用超纯水定容至刻度,摇匀,制每1mL含赖氨酸盐酸盐约2.5mg的对照品溶液。
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