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有关富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法

大C-会员头像-www.bzwz.com标准物质网 大C 0 552 2021-07-08
【摘要】本发明涉及富硒大米中硒形态分析的检测方法,尤其是涉及一种富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒的检测方法,所述测定方法包括下列步骤:(1)样品的制备:将待检测的富硒大米粉,密封储存备用;①有机硒的提取:采用透析法;②蛋白硒的提取;③多糖硒的提取;④RNA硒的提取;(2)硒含量的测定,采用氢化物原子荧光法测定,测定条件为:负高压:340V;灯电流:100mA;原子化温度:800℃;炉高:8mm;载气流速500mL/min;屏蔽气流速:1000mL/min;延迟时间:1s;读数时间:10s;加液时间:8s;进样体积:2mL;(3)数据处理。本发明的检测方法具有灵敏度高、准确性好,操作简单的优点。
  • 1.富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,其特征在于,所述测定方法包括下列步骤:

    (1)样品的制备

    将待检测的富硒大米粉碎获得粒度为100目的富硒大米干粉,密封储存备用;

    ①有机硒的提取:称取上述富硒大米干粉1.00g,加入5~10ml超纯水,进一步研磨使富硒大米干粉充分破裂,定量转移至透析袋中,用超纯水透析24h,将透析后的样品取出,于12000rpm条件下离心15min获得沉淀,所述沉淀真空干燥得有机硒m1g;

    ②蛋白硒的提取:称取上述富硒大米干粉10.00g,于500ml三角瓶中,加入0.05mol/LNaOH溶液100ml振荡2h得混合液,将混合液于12000rpm条件下离心15min,取上清液,加入0.1mol/LHCl调节pH至5.5,再次于12000rpm条件下离心15min得沉淀,将所述沉淀真空干燥得蛋白硒m2g;

    ③多糖硒的提取:称取上述富硒大米干粉2.00g,加入100ml0.5mol/LNaOH溶液,于80℃水浴加热2h提取多糖,然后于12000rpm条件下离心15min,取上清液用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次,所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1,然后加入无水乙醇至溶液最终乙醇浓度为80%,静置24h,收集沉淀,将所述沉淀真空干燥得多糖硒m3g;

    ④RNA硒的提取:称取上述富硒大米干粉10.00g,加入200ml0.025mol/LNaOH溶液摇振荡45min,然后用3mol/L盐酸调pH至7.0,搅拌10min后加热至90℃,保温10min后冷却至10℃,于12000rpm离心15min,取上清液用6mol/L盐酸调pH至2.5,5℃冷藏静置过夜,再次于12000rpm离心15min,收集沉淀加入1~2滴氨水,用30ml蒸馏水溶解,用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次,所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1,将得到的水相烘干获得RNA硒m4g;

    (2)硒含量的测定

    ①标准曲线:按0、4、8、12、16、20μg/L的浓度梯度绘制标准曲线;

    ②消化液制备:分别称取上述提取获得的有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒0.3g于50ml三角瓶中,加10ml由HNO3和HClO4按体积比4:1混合制得混合酸,冷消化过夜,次日加热消化,当溶液变为清亮无色并伴有白烟出现时,再继续加热至剩余体积2ml左右,冷却,再加5ml6mol/L盐酸,继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现,冷却,转移定容至50ml,获得消化液;

    ③测定:分别取上述消化液各2ml于10ml比色管中,加入浓盐酸2ml,加水定容至10ml,混匀后采用氢化物原子荧光法测定,依次获得峰面积荧光值X1、X2、X3、X4,将峰面积荧光值X1、X2、X3、X4分别带入标准曲线获得有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒消化液硒浓度为Y1、Y2、Y3、Y4;

    (3)数据处理

    ①富硒大米中有机硒含量=Y1*0.25÷0.3*m1÷富硒大米质量,其中富硒大米质量为1.00g;

    ②富硒大米中蛋白硒含量=Y2*0.25÷0.3*m2÷富硒大米质量,其中富硒大米质量为10.00g;

    ③富硒大米中多糖硒含量=Y3*0.25÷0.3*m3÷富硒大米质量,其中富硒大米质量为2.00g;

    ④富硒大米中RNA硒含量=Y4*0.25÷0.3*m4÷富硒大米质量,其中富硒大米质量为10.00g。

    2.根据权利要求1所述的富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,其特征在于:有机硒提取采用的透析袋规格为8000Da,透析过程中每6h离心更换一次超纯水。

    3.根据权利要求1或2所述的富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,其特征在于:所述真空干燥的真空度为-0.085~-0.095Mpa,真空干燥的温度为50~60℃。

    4.根据权利要求1或2所述的富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,其特征在于,RNA硒提取中所用氨水质量浓度为25~28%。

    5.根据权利要求1或2所述的富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,其特征在于,氢化物原子荧光法测定条件为:负高压:340V;灯电流:100mA;原子化温度:800℃;炉高:8mm;载气流速500mL/min;屏蔽气流速:1000mL/min;延迟时间:1s;读数时间:10s;加液时间:8s;进样体积:2mL。

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