1.一种免疫色谱方法，其包含：在形成了被检物质与用针对被检物质的第一结合物质修饰过的含有金属的标记物质的复合体的状态下，将该复合体在蛋白质的蛋白酶分解物的存在下在不溶性载体上展开；在不溶性载体上的检测部位上捕捉被检物质和标记物质，所述不溶性载体含有针对被检物质的第二结合物质或对针对被检物质的第一结合物质具有结合性的物质；将捕捉到的标记物质放大来检测被检物质。

2.根据权利要求1所述的免疫色谱方法，其中，蛋白质的蛋白酶分解物的分子量的范围为0.1kD～15kD。

3.根据权利要求1或2所述的免疫色谱方法，其中，蛋白质的蛋白酶分解物是在酸性条件下不存在作为不溶成分的析出物的分解物。

4.根据权利要求3所述的免疫色谱方法，其中，蛋白质的蛋白酶分解物是通过在蛋白质的蛋白酶分解物中添加酸以使pH为4以下、并除去所析出的析出物而得到的蛋白质分解物。

5.根据权利要求1或2所述的免疫色谱方法，其中，蛋白质的蛋白酶分解物是酪蛋白的蛋白酶分解物。

6.根据权利要求5所述的免疫色谱方法，其中，酪蛋白是选自αS1酪蛋白、αS2酪蛋白、β酪蛋白或κ酪蛋白中的1种以上的酪蛋白。

7.根据权利要求1或2所述的免疫色谱方法，其中，第一结合物质和第二结合物质中的至少任一方为抗体。

8.根据权利要求1或2所述的免疫色谱方法，其中，使用包含含银化合物以及银离子用还原剂的放大液来进行将捕捉到的标记物质放大的工序。

9.根据权利要求1或2所述的免疫色谱方法，其中，在形成了被检物质与用针对该被检物质的第一结合物质修饰过的含有金属的标记物质的复合体的状态下，将该复合体在蛋白质的蛋白酶分解物的存在下在不溶性载体上展开后，将洗涤液在不溶性载体上展开，然后将捕捉到的标记物质放大。

10.一种免疫色谱用试剂盒，其特征在于，具备：用针对被检物质的第一结合物质修饰过的含有金属的标记物质；和含有针对被检物质的第二结合物质或对针对被检物质的第一结合物质具有结合性的物质的不溶性载体。

11.根据权利要求10所述的免疫色谱用试剂盒，其中，所述第一结合物质和第二结合物质中的至少任一方为抗体。

高灵敏度的免疫色谱方法以及免疫色谱用试剂盒

技术领域

[0001]本发明涉及使用了标记抗体的免疫色谱方法以及免疫色谱用试剂盒。

背景技术

[0002]作为测定被检液中的特定成分的方法，存在许多利用了抗原抗体反应的免疫测定方法。在免疫测定方法中，抗体或抗原与待测定的特定成分的非特异性反应常常是个问题。因此，通常采用使用封闭剂来抑制非特异性反应的方法。作为使用了封闭剂的非特异反应抑制法，例如在ELISA的情况下将反应容器使用封闭剂进行处理，在胶乳凝聚法的情况下将胶乳粒子使用封闭剂进行处理(专利文献1)。作为封闭剂，使用牛血清白蛋白(以下简称为BSA)、酪蛋白、明胶等。

[0003]另外，在专利文献2中记载了如下内容：通过使用在EIA体系中在pH为7.2的条件下在100℃下进行了30分钟热处理而得到的酪蛋白，能制作抑制非特异反应的载体。此外，在专利文献3中公开了如下内容：通过在要进行免疫测定的反应液中添加用蛋白酶分解至分子量约为1000～26000而得到的酪蛋白来抑制非特异反应。

[0004]在免疫测定方法中，免疫色谱法由于操作简便、能在短时间内进行测定，因此很常用。作为免疫色谱法中使用的免疫反应，广泛使用竞争型反应或三明治型反应。其中，在免疫色谱法中三明治型反应是主流，在其典型例子中，为了检测试样中的由抗原构成的被检物质而进行如下操作。

首先，通过将利用针对作为被检物质的抗原的抗体而致敏得到的微粒作为固相微粒固定于色谱载体，或者通过将该抗体本身直接固定于色谱载体，从而制备具有反应部位的色谱载体。另一方面，使标记微粒被能与被检物质特异性结合的抗体致敏来制备致敏标记微粒。使该致敏标记微粒与试样一起在色谱载体上进行色谱移动。

通过以上的操作，在形成于色谱载体的反应部位上，被固定的抗体成为固定试剂，致敏标记微粒通过作为被检物质的抗原而与其特异性结合，其结果是，通过目视判断因致敏标记微粒被反应部位捕捉而产生的信号的有无或程度，即可测定试样中的被检物质的存在的有无或量。另外，在免疫色谱法中，为了抑制非特异吸附，通常在检体稀释液中添加蛋白质等封闭剂(专利文献4)。