2，4一二氯苯氧乙酸(2，4一D)为植物生长调节剂和除草剂。低浓度的2，4一D能促进植物生长，是应用广泛的水果保鲜剂，主要用于增强果实抗病力、延缓果实衰老、延长水果贮藏期；高浓度使用时作为除草剂，被广泛用于果蔬和农作物中，防除一年及多年生阔叶杂草。随着2，4一D广泛的应用，其产生的危害越来越受到关注，已被国际癌症研究机构(IARC)分类为可能是人类致癌物。现已有柑橘、西瓜、豆芽和黄瓜等常见果蔬中及环境水，m中的2，4D的残留检测的研究。为完善2，4一D农药残留分析方法标准体系，满足相关产品的分析检测、质量控制工作的需求，保证检测结果的准确性、可比性和溯源性，本研究研制了2，4一D标准物质。

1实验部分

1．1材料与试剂

2，4．D粗提品(纯度95％，上海书亚公司)；甲醇(色谱纯，ThermoFisher公司)；HPO(AR)。

1．2仪器与设备

LC一20A高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；Milli—QIntegral3纯水机(德国Millipore公司)；RE-2000旋转蒸发仪(东京理化株式会社)；ALPHRl一2LDplus冷冻干燥机(德国Christ公司)；UV．1800紫外可见分光光度计(日本Shimadzu公司)；PerkinElmerSpectrum400傅立叶变换红外一近红外光谱仪(美国珀金埃尔默公司)；Bruker400MHz核磁共振波谱仪(德国Broker公司)；UHR—TOFmaXis4G超高分辨飞行时间质谱(德国Bruker公司)

1．3制备方法

1．3．1标准物质制备适量2，4-D粗提品充分溶解于甲醇溶剂中，经半制备液相色谱系统分离纯化，收集目标峰馏分，进行旋蒸后冷冻干燥，最终获得纯度大于99％的高纯度化合物。经紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振波谱分析，对2，4一D进行定性，分装在干净、干燥的2mL棕色样品瓶中，于4℃冷藏。

1．3．2半制备液相色谱条件色谱柱：SHIM—PACKPREP—ODS(H)·KIT(250mm×20mm，5m)；流动相：A为0．1％H3PO4水，B为甲醇，0一l1min，80％A；流速10mL／min，柱温30oC；运行时间：11min；检测波长：283nm。

1．4纯度测定方法

考察了高效液相色谱方法中不同色谱柱、不同流动相和不同洗脱等条件，并得出了最佳纯度测定色谱条件。

1．4．1不同色谱柱条件采用两根不同C。色谱柱：WatersXTerraRP18(150mm×4．6mm，5txm)和DiamonsilC】8(250mm×4．6mm，5m)，在相同的洗脱条件下测定2，4一D标准物质纯度。流动相：A为甲醇，B为0．1％H3PO4溶液，0～20min，60％A；流速：1．0mL／min；柱温：30"12；运行时间：20min；检测波长：283nm。

1．4．2不同流动相条件比较I，(甲醇)／V(0．1％HPO溶液)=60／40与(乙腈)／V(0．1％H，PO溶液)=60／40两流动相体系。色谱条件：流速：1．0mL／min；柱温：30℃；运行时间：20rain；检测波长：283／11／1o

1．4．3不同洗脱条件等度洗脱，色谱柱：WatersXTerraRP18(150mm×4．6mm，5Ixm)；流动相：A为甲醇，B为0．1％H3PO4溶液，0～20min，60％A；流速：1．0mL／min；柱温：30~(2；运行时间：20min；检测波长：283nm。梯度洗脱，色谱柱：WatersXTerraRP18(150mmx4．6mm，5m)；流动相：A为甲醇，B为0．1％HPO溶液，0～20min，50％～100％A；流速：1．0mL／min；柱温：30~C；运行时间：20min；检测波长：283nm。

1．5定性分析条件

紫外光谱测定采用紫外一可见分光光度计，以甲醇为背景溶剂，在0～400nm波长范围内扫描，得到紫外光谱图。红外光谱测定采用傅立叶变换红外一近红外光谱仪，采用KBr压片法得到红外光谱图。质谱测定采用超高分辨飞行时间质谱，电喷雾电离源，负离子扫描方式，多反应监测(MRM)；离子源温度20O℃；雾化气(N2)25mL／min；气帘气(N2)．55mIJmin。核磁共振波谱测定采用400MHz核磁共振谱仪，氘代试剂为DMSO-d6(含TMS)，25~C条件下得到氢谱和碳谱。