红枣又叫良枣、华枣,是鼠李科类植物枣属的果实,原产于中国。红枣中含有糖类、蛋白质等可促进肝脏合成蛋白,是肝脏的营养剂。枸杞中含有丰富的枸杞多糖、甜菜碱、氨基酸等活性成分有养肝明目、补气补血、增强非特异性免疫功能等作用,且来源广泛,具有极高的医疗和保健功能,在保健品的研发中具有广阔的应用前景。口服液是一种具有携带方便,治疗急性病的口服体制剂。

近代研究发现,肝昏迷是血浆中支链氨基酸与芳香氨基酸比例失调导致的,当两者的比值降低至1.0~1.5时就会发生昏迷。所以可通过调节口服液中两种氨基酸配比的方式来治疗肝昏迷。本实验以市场上所售的14AA复方氨基酸口服液的配方为基础,提取红枣枸杞的有效中药成分对14AA口服液进行优化。常见的中药提取成分方法有超临界流体萃取法,组织破碎提取法、超声微波法等。超声微波法简单易操作、穿透能力强,能快速提取出药材中的有效成分,所以本实验采用超声微波法对红枣枸杞中的有效成分进行提取,并对配制的口服液中进行各指标质量检测。

1实验

1.1仪器和原料

DF-101S超声清洗仪,巩义市予华仪器有限公司;pH计(批号20180910),上海馨晟试化工有限公司;UV-2550紫外可见分光光度计,岛津仪器有限公司;FA2004分析天平,上海恒平科学仪器有限公司;DHG-9076A电热恒温鼓风干燥箱,上海精宏实验设备有限公司。红枣产地为新疆,枸杞产地为宁夏中宁,葡萄糖、苯酚、浓硫酸、无水乙醇均为AR,购于成都市科隆化学品有限公司。

1.2绘制标准曲线

精确称取100mg干燥至恒重的葡萄糖标准品于100mL的容量瓶中,加蒸馏水定容,摇匀备用。用移液枪分别移取一定体积的葡萄糖溶液于带塞试管中,加入相应体积的超纯水,配制浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/mL的葡萄糖溶液,加蒸馏水至体积为2mL。分别加入5mL质量分数为0郾5%的苯酚溶液,然后快速分别加入8mL浓硫酸,摇匀,静置20min至室温,另外取一支带塞试管,加入2mL蒸馏水后,同上操作,作为空白对照溶液。用紫外分光光度计在300~600nm范围内进行波长扫描,在489nm处检测到最大吸收波长,取489nm处的吸光度,绘制标准曲线。

1.3多糖的提取

称取3g干燥至恒重的红枣枸杞(红枣枸杞各1.5g),剪碎过筛后置于锥形瓶中,加入60mL的蒸馏水,置于固定功率和温度的超声清洗仪中,经过一定时间的提取后,抽滤。向提取液中加入三倍体积80%的无水乙醇,摇匀,静置24h后进行抽滤,将沉淀物放入真空干燥器中进行干燥得粗多糖。

(1)称取3g干燥至恒重的红枣枸杞(红枣枸杞各1.5g),剪碎过筛后置于锥形瓶中,加入60mL的蒸馏水,温度设置为70益,超声功率分别为120W、140W、160W、180W、200W。经过一定时间的提取后,测得粗多糖的提取率。

(2)设置液料比分别为1.30、1.35、1.40、1.45、1.50,同上述方法,得出各个液料比下粗多糖的提取率。

(3)设置超声时间分别为25min、35min、45min、55min、65min,同上述方法,得出各个液料比下粗多糖的提取率。

(4)设置提取温度分别为50益、60益、70益、80益、90益,同上述方法,得出各个液料比下粗多糖的提取率。采用Origin8.1软件绘制各因素对多糖提取率的影响曲线。

1.4口服液的配制

将冷藏3h后的红枣枸杞提取液取出,加入0.025g亚硫酸氢钠作为抗氧化剂、加入3.8%的柠檬酸钠作为酸味调节剂至pH=4.4,然后加入相应质量的14种氨基酸。14种氨基酸的质量比例:L-亮氨酸0.688g、L-异亮氨酸0.563g、L-缬氨酸0.525g、L-甘氨酸0.563g、L-脯氨酸0.500g、L-丙氨酸0.481g、L-赖氨酸0.476g、L-精氨酸0.375g、L-丝氨酸0.313g、L-苏氨酸0.281g、L-组氨酸0.150g、L-蛋氨酸0.063g、L-苯丙氨酸0.063g、L-色氨酸0.041g,然后加蒸馏水定容至500mL,摇匀后得到棕黄色的口服液。