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(2)浸泡时间对灵芝发酵粉三萜得率的影响
由图2可知,不同浸泡时间对灵芝发酵粉三萜化合物的提取得率有极显著影响(p<0.01)。浸泡80min时三萜得率达到最高值0.6423mg/g,当浸泡时间在80min以下时,灵芝发酵粉三萜得率逐渐上升;当浸泡时间超过80min时,三萜得率在逐渐降低,因此,选择最佳的浸泡时间为80min。
(3)料液比对灵芝发酵粉三萜得率的影响
由图3可知,不同的料液比对灵芝发酵粉三萜化合物得率是有极显著影响(p<0.01)。当料液比为1∶30时,三萜得率最高;料液比过低过高都会使三萜得率降低。分析其原因可能为一定量的灵芝发酵粉,加乙醇量过少时,不利于灵芝发酵粉中三萜化合物的溶出,使得95%乙醇中三萜化合物较少,当料液比增大时,灵芝发酵粉中的三萜化合物全部溶出,三萜得率较高,因此选择的最佳料液比为1∶30。
(4)回流温度对灵芝发酵粉三萜得率的影响
由图4可知,回流温度对灵芝发酵粉三萜得率有极显著性影响(p<0.01)。当回流温度为85℃时,三萜得率最高,为0.6168mg/g;当回流温度高于85℃时,三萜得率反而逐渐会降低。究其原因为在一定温度范围内,温度越高越有利于灵芝发酵粉中三萜化合物的溶出;当温度过高时,三萜化合物的稳定性受到影响,使其得率降低。故选择回流温度为85℃。
(5)回流时间对灵芝发酵粉三萜得率的影响
由图5可以看出,回流时间对三萜得率的影响极显著(p<0.01)。回流3h时,三萜得率最高;回流超过3h,三萜得率反而会降低。因此,选择最佳回流提取时间为3h。
(6)回流次数对灵芝发酵粉三萜得率的影响
由图6可以看出,灵芝发酵粉三萜得率随着回流次数的增加呈现上升趋势,在回流次数为5次时三萜得率达到0.6849mg/g,但在提取3次以后,三萜得率提高不明显,故从经济和时间成本考虑,选择提取3次为最佳的提取次数。经方差分析,该范围内,回流次数对三萜得率的影响极显著(p<0.01),故选择回流次数为3次。
(7)响应面试验结果
试验选取料液比、回流时间、回流温度作为考察因素,根据Box-Behnken试验设计原理,以灵芝发酵粉三萜得率作为响应值,采用3因素3水平进行响应面试验,结果见表2。
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