S-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosylmethion-inesynthetase,SAMS,EC:2.5.1.6)是生物体内S-腺苷甲硫氨酸代谢途径中的关键酶,它催化三磷酸腺苷(ATP)和L-甲硫氨酸(Met)反应合成S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)叫，也是目前已.知的生物体内合成SAM的唯一途径。

SAM是广泛存在于生物中的一-种生理活性分子，也是S-腺苷甲硫氨酸代谢途径关键的中间产物，参与转甲基、转硫、转氨丙基等反应。SAM作为主要的甲基供体,在大多数甲基化反应中起着核心作用，如核酸、蛋白质、脂类和多糖的甲基化回。它参与多种不同的代谢过程,其中主要有合成多胺(精胺、亚精胺和腐胺等)、乙烯及谷胱甘肽。此外，SAM还可与RNA结合参与体内基因表达的调控。因此,研究SAMS基因功能对植物具有重要的意义。

目前,多种植物中SAMS的cDNA已被克隆出来，如拟南芥、小麦凹、杨树、石蒜叫、芜菁、松树、大白菜、芥菜和杜梨,但是未见洋葱SAMS基因的报道。由于SAMS的重要生物学功能，存在多种类型的SAMS基因，它由一个多基因家族所编码，共同调节着SAM的合成速率。因此，克隆不同物种的SAMS基因具有重要的意义。洋葱(Allium(cepaL.)为葱科(Liliaceae)葱属(Allium)2年生草本蔬菜作物，是重要的世界性蔬菜，也是我国主要栽培和出口蔬菜品种，具有较强的抗冻、抗旱能力。

本研究拟以洋葱为材料，克隆SAMS基因，并对其序列特征进行分析，旨在为研究AcSAMS在洋葱抗旱和耐冻过程中的作用机理提供理论依据，为开展洋葱抗性分子育种奠定基础。

1材料和方法

1.1材料

以红皮洋葱叶片为材料提取RNA。根据洋葱转录组测序获得的SAMS基因的中间片段序列，设计了RACE引物。本研究所需引物如表1所示。

1.2总RNA提取及第1链cDNA合成

用多糖多酚植物RNA提取试剂盒(北京华越洋生物科技有限公司)提取洋葱叶片总RNA。提取总RNA的操作步骤按照试剂盒的说明书进行。利用B26作为引物,以3μg总RNA作为模板，合成cDNA第1链。第1链eDNA合成的反应体系及具体操作步骤参照PrimeSeriptII1*StrandeDNASynthesisKit(TaKaRa)说明书进行。