枸橼酸托法替尼，2012年11月6日FDA批准其片剂上市。用于对氨甲喋呤治疗应答不充分或不耐受的中至重度活动性类风湿关节炎成人患者，可用作单药治疗或与氨甲喋呤或其他非生物制品抗风湿药物（DMARDs）联用。其作用机制与当前大多数抗风湿治疗药物主要作用于细胞外靶点不同，托法替尼是一种Janus激酶（Januskinase，JAK）抑制剂，以细胞内信号转导通路为靶点，作用于细胞因子网络的核心部分，且对Janus激酶3（Januskinase3，JAK3）的抑制强度是对Janus激酶2（Januskinase2，JAK2）及Janus激酶1（Januskinase1，JAK1）的5~100倍，在有效治疗剂量下，托法替尼对JAK1仅部分抑制，对JAK2却无明显抑制作用。

根据国家食品药品监督管理局药物审评中心颁布的《手性药物质量控制研究技术指导原则》要求，对于单一对映体药物，必须制订立体异构体检查项，以控制立体异构体杂质的含量。枸橼酸托法替尼化学名为：3-（（3R，4R）-4-甲基-3-（甲基（7H-吡咯并［2，3-d］嘧啶-4-基）氨基）哌啶-1-基）-3-氧代丙腈枸橼酸盐，为单一立体异构体药物，其结构中有2个手性中心，成品中可能存在3种光学异构体杂质，包括1个对映异构体和2个非对映异构体（具体结构见下图1）。非对映异构体在普通的高效液相色谱上就可分离，对映异构体却需用手性柱分离，另外，对映异构体的检测也是该项目的关键技术之一，更是难点，目前国内外尚未见到相关报道。

本实验选择手性柱CHIRALPAKAD-H，填料为直链淀粉-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯），筛选了异丙醇-乙腈、异丙醇-正己烷、异丙醇-正己烷-乙腈、异丙醇-正己烷-甲醇的混合溶剂（0.2%的三乙胺作添加剂）等流动相体系并优化柱温、流速、进样量，开发了一种测定枸橼酸托法替尼原料及片剂中对映异构体杂质含量的正相高效液相色谱方法。方法验证结果显示，该方法准确、简便、灵敏，能用于枸橼酸托法替尼原料及片剂中对映异构体杂质含量的测定。

1 仪器与试药

1.1仪器

SHIMADZULC-20高效液相色谱仪（岛津公司，日本，配有高精度二元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱和VWD检测器）；手性色谱柱DaicelCHIRALPAKAD-H（250mm×4.6mm，5μm），填料为直链淀粉-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯），日本大赛璐公司；KQ-250DE数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；梅特勒托利多XS-105型精密电子天平，瑞士；0.45μm微孔滤膜（上海迪清过滤技术有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水真空泵（巩义市子华仪器有限责任公司）。

1.2 试药

正己烷、异丙醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，AmethystChemicals，美国）；三乙胺（分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司）；枸橼酸托法替尼原料及片剂样品、托法替尼对映异构体（本公司提供）。