1 前 言

辛弗林(Synephrine)是从枳实中提取的一种生物活性物质，化学名为2-甲氨基-1-(4-羟苯基)乙醇，分子式为C9H13NO2，为肾上腺素受体的β-3激体，具有升压、预防能量过剩及降血脂等作用。因其无成瘾性，该化合物广泛用于减脂，调节肠胃和刺激神经等方面，临床上用于治疗感染中毒性休克、过敏性休克等疾病。由于化学合成的辛弗林为外消旋体，D-对映体可能存在副作用，因此市售的辛弗林均为植物来源的L-对映体。但是，来源于枳实、柑橘、青皮、陈皮等的L-辛弗林提取物纯度低、杂质多，不仅包含与L-辛弗林性质接近但分子量差异大的杂质，还包含色素类，它们既可能干扰或影响L-辛弗林的功能，还可能产生副作用，必须尽量除去。

分离L-辛弗林的现有方法主要包括离子交换法、吸附法、高速逆流色谱法及反胶束萃取法等，但效果均不佳，其产品的辛弗林含量通常低于50%，主要原因是分离时选择的方向均集中在富集L-辛弗林上，而忽略了杂质特性。为此，有必要创新思路和方法，针对性地分离杂质和色素，以获得高纯度L-辛弗林制品。超滤是以压力为推动力，基于超滤膜孔径分离溶质的技术，广泛应用于在中药提取、注射液、口服液及大输液等制备过程中。假设L-辛弗林溶液中的杂质分子直径与L-辛弗林差异足够大，从理论上讲可采用超滤技术实现分离，但目前还尚未见有这方面的研究报道；大孔吸附树脂是基于其极性、孔径和比表面积与吸附物间的差异进行分离，较活性炭吸附的选择性更强，同时由于其可反复再生使用且对设备要求简单，故广泛应用于环境保护、冶金工业、化学工业、制药和医学卫生部门等领域。

目前，也尚未见其用于分离L-辛弗林和色素的报道。本文拟以枳实提取物为原料，先通过系列膜分离除去与L-辛弗林分子量差异大的杂质，再选择大孔吸附树脂，吸附分离色素，同时探讨了膜和吸附分离杂质的优化工艺条件，旨在提供一种分离纯化高纯度L-辛弗林的新方法。

2实验部分

2.1仪器和试剂

SHA.C水浴恒温振荡器，江苏金坛市亿通电子有限公司；TU1901紫外可见光分光光度计，北京普析通用仪器有限公司；LC3000高效液相色谱仪，北京创新恒通科学仪器有限公司；PHS-3C精密酸度计，上海雷磁仪器厂；HPS超滤器、RO-1812反渗透设备，江苏久吾高科有限公司；MB99-3自动液相色谱分离层析系统，上海泸西分析仪器有限公司。枳实粗提物(辛弗林含量为30%)，湖南鑫利生物有限公司；辛弗林标准品(99.8%)，中国药品生物制品检定所；3,5-二硝基水杨酸(化学纯)，成都市科龙化工试剂厂；牛血清白蛋白，上海源叶生物科技有限公司；阴离子交换树脂：D290、D202和D315，大孔吸附树脂：XDA-7、D3520、HZ801和HZ816，郑州勤实科技有限公司；95%乙醇(分析纯)，重庆川东化工有限公司；其余试剂均为分析纯。

2.2实验方法

2.2.1制备枳实超滤液先将枳实粗提物按固液比为1:20(mg/mL)的比例溶解于pH4的盐酸溶液中，再进行硅藻土真空过滤，收集滤液，即浓度为2.5~4.5mg/mL的辛弗林滤液分别泵入截留分子量为3kDa、5kDa、10kDa和30kDa的超滤器中，控制压力为0.05~0.25MPa进行超滤分离，直至截留液体积降低至超滤原液体积的10%时即制备出枳实超滤液，其中L-辛弗林浓度为1~4mg/mL。定时取样，测定膜通透过液体积和透过液中的辛弗林、糖类、蛋白质、色素等的浓度，再换算成膜通量等指标。

2.2.2树脂筛选实验各取适量XDA-7、HZ801、HZ816和D3520树脂，分别用1~2BV的95%乙醇浸泡3~4h后放出乙醇，同法用95%乙醇反复洗涤树脂至流出液用纯净水稀释3倍无浑浊时止。最后用纯净水反复洗涤，直至洗涤液无乙醇味时即制备出活化树脂，备用。各取适量D290、D202和D315树脂在3BV的饱和食盐水中浸泡24h，然后放尽食盐水，用纯水洗至洗涤液清澈后，先加入3BV的4%HCl溶液浸泡4h后用纯水洗至中性，再加入3BV的4%NaOH溶液浸泡4h后用纯水洗至中性，备用。将预处理后的活化树脂分别放于具塞锥形瓶中，加入12倍树脂体积的枳实超滤滤过液，先在水浴恒温振荡器中以80r/min的速度吸附8h，然后吸取定量上层清液，测定其中辛弗林和色素含量，并按照公式(1)计算树脂的吸附量。选择吸附色素容量最大且吸附辛弗林容量最小者用于后续的辛弗林脱色研究。