由谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸合成的还原型谷胱甘肽（Glutatione,GSH）主要用于保护肝脏，帮助肝脏排毒，抑制脂肪肝的形成，改善因感染或中毒导致的肝炎.⑴由此可见，在临床上定性定量检测GSH有重要意义.

目前GSH的检测主要有高效液相色谱法、电化学分析法等.荧光分光光度法因为操作简单、使用方便、费用低而被广泛应用于离子测定及药物检测.7-（二乙基氨基）香豆素—3-甲酸有发光团，可发射蓝色荧光，应用于生物检测•具有内滤效应的MnC>2纳米薄片可猝灭荧光，建立tum-off体系.本论文拟采用荧光分析法，首次利用MnO?纳米薄片与7—（二乙基氨基）香豆素-3-甲酸构造荧光信号tum-off平台，用于定量测定GSH,建立一种测定GSH的新方法.

1实验仪器及方法

1.1仪器和试剂

荧光分光光度计（日立F-2700）；高猛酸钾文章编号:1674-5248（2020）02-0014-04（批号：CAS号7722-64-7）和硫酸镭（批号：HG3-1081-77）;谷胱甘肽（还原型）（批号：G105426-lg）和7—（二乙基氨基）香豆素—3—甲酸（批号：D154333-lg）购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;不同pH值的柠檬酸钠一柠檬酸缓冲液（NaCA-CA）、NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液（PB）均为实验室自制.所有试剂除特别说明外均为分析纯，实验用水均为蒸憾水.

1.2方法

1.2.1MnO?纳米薄片的制备⑹称取0.0632gKMnC）4、0.1014gMnC）2溶解于适量蒸憾水中，在离心机上离心10min,用95%乙醇和水分别洗涤5次，置于65P烘干箱4h,取出黑色MnO?纳米薄片备用.在分析天平上称取MnQ纳米薄片0.0780g,用蒸憎水将其溶解并在50mL容量瓶中定容.超声处理得到分散物.

1.2.27—（二乙基氨基）香豆素—3—甲酸和MnO?荧光体系的建立取0.5mLlmmol/L的7—（二乙基氨基）香豆素—3—甲酸和0.2mL1.56mg/mL的MnO?于比色管定容至5mL,充分混合，常溫静置lOmin,从而建立7—（二乙基氨基）香豆素一3—甲酸—MnO2纳米猝灭体系.设置Xex=400nm进行测定，记录荧光强度.

1.2.3测定还原型谷胱甘肽在上述体系中加入不同量的GSH,在50七水浴中反应40min,选取Xex=400nm作为激发波长进行测定，记录荧光变化量.

2结果与讨论图2GSH的线性

2.1复合体系的荧光光谱图

7-（二乙基氨基）香豆素-3-甲酸因具有特殊的荧光发光团，当加入一定量的MnOz后荧光被猝灭，再加入一定量的GSH后，荧光值逐渐增加，根据荧光信号的开关可用于定量检测GSH,见图1.向7—（二乙基氨基）香豆素-3—甲酸-MnOz复合体系加入不同量的GSH,实验结果见图2.由图2可知,GSH的量在2-18nmol/mL范围内与荧光恢复值具有良好的线性关系.

2.2最佳实验条件

2.2.1MnO2的优化取0.5ml40ptg/mL的香豆素，加入不同量的MnO2＞实验结果见图3.从图3中可看出，增加Mn（）2浓度，7-（二乙基氨基）香豆素—3-甲酸的荧光值明显降低.本实验选取0.06mg/mL时，达到最好的猝灭效果.

2.2.2pH的选择本实验选择了BR、NaCA-CA和PB等缓冲试剂进行考察，测定其对GSH检测体系的影响，最终选择PB作为该体系的缓冲溶液，进一步确定了最佳pH为6.3,实验结果如图4.