作为PCR模板的核酸标本来源广泛，用于提取核酸的材料种类可能差异很大，如1000多万年前的木兰科叶子化石、已灭绝动物皮中发现的肌肉、单根人类毛发和石蜡包埋的活组织标本等；也可以从培养的细胞和微生物中提取。虽然大多数PCR对模板的要求不高，纯度要求也不严，用量也低，待扩增核酸仍需要部分纯化，以除去核酸标本中的蛋白酶、核酸酶、Taq DNA聚合酶抑制物以及能结合DNA的蛋白。纯化核酸的目的主要在于：①除去杂质，特别是除去干扰Taq酶活性的物质；②使待扩增的靶序列DNA暴露和浓缩，从而保证有足量的DNA模板启动PCR反应；③有利于评价扩增体系的灵敏度，并根据产物对靶DXA进行定量分析。

提取DNA的基本过程是在EDTA存在的条件下，用蛋白酶K及SDS裂解细胞，消化蛋白质，使核蛋白解聚及胞内DNA酶失活；然后用酚、氯仿多次抽提以去除蛋白质，在DNA中若混有少量RNA，可用RNA酶去除；最后用乙醇沉淀得到DNA在提取中应尽量保持DNA完整性和纯度，防止DNA降解。被扩增的DNA特定序列不需要事先从样品DNA中分离，因为PCR产物的序列，即反应的特异性是由寡核苷酸引物所决定的。单、双链DNA和RNA都可作为PCR的模板，如果起始模板为RNA，须先通过逆转录得到第一条cDNA链后才能进行PCR扩增。理论上，PCR可以扩增极其微量的核酸样品(甚至是单个细胞的DNA)，但是为了保证反应的特异性，PCR反应中的模板加入量一般为102～105个拷贝靶序列，即一般宜用ng量级的克隆DNA，μg级的染色体DNA或10。倍的待扩增片段来做起始材料，人类基因组DNA1μg相当于3×105个单拷贝靶分子，大肠杆菌DNA 1ng相当于3×105个单拷贝靶分子。因此扩增不同拷贝数的靶序列时，加入的含靶序列的DNA量也不同。另有资料认为，用小分子质量和线性模板DNA扩增效果较好。因此当使用极高分子质量的DNA(如基因组DNA)时，可以使用低频率切点的限制酶(如NotI或SatI)先进行消化，再作扩增效果好；闭合环状质粒作PCR模板时最好先线性化处理，以提高扩增效率。

相关推荐：蛋白酶，核酸酶，核苷酸，大肠杆菌