北方伟业计量集团有限公司
近年来,用PCR技术检测沙门氏菌得到了迅速发展,产生了许多种PCR法,如常规PCR、巢式PCR、多重PCR。也可几种方法结合使用,有研究将常规PCR与巢式PCR组合,根据沙门氏菌中保守的16S rRNA基因为模板设计了一对引物,扩增的片段为555bp。经过优化设计反应条件,只对沙门氏菌产生特异扩增,敏感性达30cfu。为了对扩增结果进行鉴定,又在这两条引物之问设计一条半套式引物。经巢式PCR检测证明,第一次产物是正确的,且灵敏度提高至3cfu。此外,还可将PCR与微孔板检测、ELISA技术、探针杂交有机结合起来。
在试图减少检测时间方面,采用在缓冲蛋白胨水(BPW)中非选择性增菌6h,然后进行细胞破碎和PCR,可在接受食品样品后12h内完成检测,并可检测不同沙门氏菌血清型。试验表明,在BPW中增菌8h后,方法的灵敏性不增加,这限定了最佳增菌时间为6h。增菌后,粗提、PCR、电泳共需5~6h,这样可在12h内完成,相对需更长增菌时间的检测方法来说缩短了时间。
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