北方伟业计量集团有限公司
目前,能够检测桔霉素含量的方法有很多,其中主要的检测方法有:分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)、抑菌圈法、薄层层析法(TLC)、免疫学分析法、液-质联用法(HPLCMS)、高效毛细管电泳法(CEP)、气-质联用法(GC-MS)等。其中传统的检测方法,如抑菌圈法、分光光度法、薄层层析法,这些检测方法的优点是成本低,操作简单,缺点是它们的精确度以及灵敏度相对其它方法较低,因此目前已较少使用,或只用于定性检测。下面主要介绍的几种目前比较常用的、准确度比较高的检测方法及其特点。
免疫学分析法主要包括胶体金免疫技术和酶联免疫技术。在免疫学分析法中,最常用的检测红曲产品中桔霉素的方法是酶联免疫吸附法(ELISA)。免疫传感器和一些其他的免疫学分析法,也逐渐在桔霉素的检测上开始应用。LIYN通过酶联免疫法测试桔霉素的含量,检出的最低限度为0.01ng/mL。汪媛媛等,采用竞争酶联免疫法对桔霉素的含量进行检测,检出的最低限度为10μg/L。这种方法和其他方法相比误差小、灵敏度高,但成本较高。
高效液相色谱法(HPLC)是目前比较常用的用于检测红曲产品中桔霉素的一种方法。陈蕴、许赣荣等,用乙腈作为流动相,选择紫外检测器进行桔霉素的测定,测定结果重复性较好。班昭等,进行检测时选择甲醇、乙腈、水(10∶70∶20)三者形成的混合液作为流动相,选择荧光检测器进行红曲霉中桔霉素的检测,最终得到较好的分离效果。HPLC检测方法能够选择多种色谱柱、前处理方法、检测器、流动相,所以可以对不同种的红曲产品进行检测。这种检测方法有很多优点,比如:分辨率好,而且应用范围非常广泛,灵敏度很高,操作自动化等,但是它的前处理太过于复杂,因此没有办法进行批量检测。
高效毛细管电泳法(CEP)是主要应用于药品检测领域的一种检查方法。陈军等,通过检测桔霉素在中药中的含量,确定25℃的柱温,212nm的波长,最终得到了98.8%~101.1%的相对回收率,以及0.5mg/mL的检测限。卢健采用高效毛细管电泳法对霉变的水果进行检测,选用无水乙醇作为提取剂,40min超声萃取时间,最终得出最低检出限为2.0μg/mL,回收率为96.19%。CEP和HPLC相比之下,具有分析时间短、所需样品少等优点,而且CEP具有专属性强、重现性好的特点,但此方法较HPLC相比费用较高,在食品工业中难以普及。
吉小凤等,采用液-质联用法(HPLCMS)对红曲霉中桔霉素进行定性和定量测定,该法中流动相采用甲醇∶水(90∶10),质谱则采用电喷雾源正离子方式,此方法的精密度为2.0%,检测限为5μg/kg。李燕等采用液-质联用法进行测定,其中定量限为2.5μg/kg。HPLC-MS的优点是操作简单,很少受到杂质的干扰,并且对痕量化合物能够准确的进行定量分析。
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